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實驗兩對半的檢測ppt課件

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實驗兩對半的檢測ppt課件

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這是實驗兩對半的檢測ppt課件下載,主要介紹了ELISA的概念;ELISA技術特點;ELISA技術的應用;實驗目的;為什么不檢測核心抗原;雙抗原(體)夾心法測抗體;競爭抑制法測抗體;實驗操作,歡迎點擊下載。

ELISA檢測“乙肝二對半” (Enzyme linked immunosorbent Assay ELISA) ELISA的概念 酶聯免疫吸附試驗 (enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA) 酶聯:抗原或抗體的酶標記。 免疫:以抗原抗體特異性反應為基礎。 吸附:抗原或抗體包被于固相載體表面。 在固相載體表面實現抗原抗體的反應,通過酶標記的手段,酶催化底 物形成水解、氧化或還原反應,形成有色物質,其顏色的深淺與標本中的 抗原或抗體的量直接相關。 ELISA技術特點 具有良好的靈敏度和特異性,能滿足臨床需要,應用廣泛。 操作簡單、無需昂貴的儀器投入,價格便宜。 對環境幾乎沒有污染。 ELISA技術的應用 檢測抗原的方法: 雙抗體夾心法 競爭法 檢測抗體的方法: 雙抗原夾心法 間接法 競爭法 捕獲法 實驗目的 掌握ELISA法檢測“乙肝二對半” 的原理、操作步驟及注意事項。 掌握檢測“乙肝二對半”的臨床意義。 什么是“乙肝二對半”? “乙肝兩對半”是指:表面抗原(HBsAg)、表面抗體(HBsAb)、e抗原( HBeAg )、e抗體(HBeAb)、核心抗體(HBcAb) HBsAg本身不具有傳染性,只具有抗原性 保護性抗體: HBsAb 傳染性指標: HBeAg , HBcAg HBeAb, HBcAb不是保護性抗體,而是反映曾被HBV感染的重要指標。 為什么不檢測核心抗原(HBcAg) HBcAg主要位于病毒顆粒中,只有少數游離。 機體免疫系統對HBcAg很敏感,易產生高滴度的HBcAb,與HBcAg 形成免疫復合物。 血清中, HBcAg可丟失部分氨基酸。 “乙肝二對半”的檢測原理 HBsAg:雙抗體夾心法 HBsAb:雙抗原夾心法 HBeAg:雙抗體夾心法 HBeAb:中和競爭法(血清中的e抗體與固相e抗體競爭結合e抗原) HBcAb:競爭抑制法 雙抗原(體)夾心法測抗體(原) 競爭抑制法測抗體 中和競爭法測抗體 試劑盒組成 包被反應板:固相的抗原或抗體 酶結合物:酶標記的抗原或抗體 顯色劑:分A、B二瓶 終止液 對照:陽性對照,陰性對照 濃縮洗滌液 中和試劑(只有檢測HBeAb的試劑盒才有) 實驗準備 配制洗滌液:用蒸餾水按1:20稀釋濃縮洗滌液。 為節省試驗時間,除檢測核心抗體(HBcAb)組外,其余組可在加樣后的溫育時間中才配制洗滌液。 實驗操作 1、加樣:第一、二孔為陰、陽對照孔,分別加入陰、陽對照50ul。其余各孔為樣品孔,各加入待測標本50ul(檢測HBcAb 時,待測標本需用稀釋后的洗滌液做1:30稀釋)。 2、加中和試劑(只有檢測HBeAb時才需要):每孔50ul 3、加酶結合物:每孔50ul 4、溫育:封板→充分混勻后置37°C水浴30分鐘 5、洗滌:棄去反應條孔內液體,用洗滌液注満每孔,放置或振蕩1分鐘,棄去拍干→反復5次(注意:最后一次一定要拍干) 6、顯色:每孔先加顯色劑A 50ul,再加顯色劑B 50ul,混勻后置37°C水浴10分鐘 7、中止顯色:每孔加入中止液50ul 8、判斷結果: ①目測法: ②比色法:波長450nm讀取各孔OD值 HBsAg, HBsAb, HBeAg 樣品OD值/陰性對照OD值≥2.1 HBeAb , HBcAb 陰性對照OD值/樣品OD值≥2.1 (建議雙波長比色(450/630nm);臨界值的確定請參考實驗指導,不同的試劑盒和檢測原理,臨界值的設定均不同) ELISA的注意事項 標本:內源性(RF、補體、嗜異性抗體等) 外源性因素(溶血、細菌污染、保存不當、凝集不全、防腐劑NaN3等)(P229) 試劑:試劑質量、批號、是否失效(冰箱溫度)、平衡(37度°C30分鐘)、搖勻 加樣:加樣準確、不可太快,避免加在上部和產生氣泡。 溫育:溫度(定期觀察與登記)、時間、濕度、封片(不可重復用) 洗板:洗滌液用蒸餾水或去離子水現配、防止洗板機堵塞、洗完要拍板。 顯色:加試劑時不可重復加和漏加,或加在兩孔之間,不要產生氣泡,及時終止。 比色:建議用雙波長(可排除標本濃度、干擾色、電路干擾、板底部劃痕的影響)。 結果判定:反應終止后10分鐘內 質量控制:內對照、室內質控、室間質評等(全程質控意識) 表面抗原陽性結果、灰區標本、矛盾結果或少見模式均須復查 生物安全:試劑盒應視為有傳染性物質,請按傳染病實驗室檢查規程處理。 常見的檢測模式(臨床意義2) 思考題 sAg檢測時,有哪些因素可能導致陰性對照孔也出現顏色? 為什么建議用雙波長比色。

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《實驗兩對半的檢測ppt課件》是由用戶huangyixuan于2020-09-15上傳,屬于科學課件PPT。

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